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腫瘤分化程度及淋巴結轉移關聯綜述論文
細胞癌變及惡性腫瘤的形成是多因素、多階段、多基因變異所致的結果。在食管癌的發生和發展過程中也有許多癌基因和抑癌基因發生結構和功能的變化,出現失活和異常表達n0]。目前在腫瘤發生、發展過程中已廣泛開展應用分子生物學技術研究癌基因的突變狀況。本實驗應用聚合酶鏈反應一單鏈構象多態性分析(PCR—SSCP)法檢測食管鱗狀細胞癌組織中P53抑癌基因的突變,旨在研究1:''53基因突變與腫瘤的分化程度及淋巴結轉移情況的關系。
1資料與方法
1.1一般資料
選取我院2009—2010年食管鱗狀細胞癌患者36例,男25例,女11例;年齡39-75歲,中位年齡59歲;其中有淋巴結轉移21例。
1.2方法
1.2.1提取DNA:取手術切除標本,取組織蠟塊切片10片,厚度為1O一20m,放入試管中,用酚氯仿法提取DNA。試劑由達柯公司提供。
1.2.2PCR.SSCP:正常對照采用人外周血白細胞DNA;P53基因第5、6、7和8外顯子,片段長度分別為21lbp、185bp、139bp、200bp。PCR反應條件:94℃保溫lmin、55℃40s、72℃30s共32個循環后72℃延伸5min,反應完成后,取5l產物行2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴增產物。然后取1OPCR產物加等量變性上樣指示劑,沸水中變性8min,立即冰浴5min,取6上樣于8%非變性聚丙烯酰胺凝膠行垂直電泳。
1.3統計學方法
計數資料以率(%)表示,組間比較采用檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。
2結果
2.1P53基因的突變與人外周血白細胞DNA譜帶對照,突變的標本顯示異常泳動帶,表現在增多、減少或變位。在36例食管鱗狀細胞癌組織中出現P53基因突變l4例,突變率為38.89%,其中第5外顯子4例、第6外顯子3例、第7外顯子2例、第8外顯子5例。作者單位:450052鄭州市,鄭州大學第五附屬醫院病理科
2.2腫瘤分化程度與P53基因突變的關系依據常規病理,將食管鱗狀細胞癌的分化程度分為高分化、中分化、低分化癌。36例食管鱗狀細胞癌患者中,高分化癌9例,P53基因突變2例(22.22%);中分化癌l6例,P53基因突變5例(31.25%);低分化癌11例,P53基因突變7例(6364%)。低分化癌的P53基因突變率明顯高于中分化、高分化癌的突變率(P<0.05)。
2.3淋巴結轉移與P53基因突變的關系36例食管鱗狀細胞癌患者中,有淋巴結轉移者2l例,P53基因突變l2例(57.14)%;無淋巴結轉移者15例,P53基因突變2例(13.33%)。有淋巴結轉移者P53基因突變率高于無淋巴結轉移者突變率(P<0.05)。
3討論
本文36例食管鱗癌患者中發生P53基因突變l4例,突變率為38.89%,表明在食管鱗癌發生時,有較高P53基因突變率。P53基因在正常細胞生長分化過程中起著負調控作用,而突變的P53基因則失去了正常P53基因的功能,引起細胞惡性增殖,導致腫瘤的發生。P53基因位于染色體17P13,是人類腫瘤中突變率較高的抑癌基因,突變點多在5—8外顯子。大量研究證實P53基因突變參與了食管鱗癌的發生與進展,在食管鱗癌中有較高P53基因突變率。本結果表明:(1)低分化癌的P53基因突變率明顯高于中分化、高分化癌的突變率(P<0.05);(2)有淋巴結轉移者P53基因突變率高于無淋巴結轉移者突變率(P<0.05)。綜上所述,腫瘤分化程度及淋巴結轉移情況與P53基因突變有相關性。
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