重組豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白的原核表達及鑒定

目的 原核表達豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白,并對其反應原性進行分析.方法 通過FCR從已構建的豬源戊型肝炎病毒全基因克隆擴增ORF2編碼382～674位氨基酸序列的基因片段,將擴增產物插入到pMD18-T載體中,亞克隆至原核表達載體pET28a(+),構建pET28a-293表達載體,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導表達.表達產物經Ni-NTA層析柱純化后,進行SDS-PAGE、Western blot及ELISA鑒定.結果 成功擴增到904 bp的目的 基因.重組載體pET28a-293經雙酶切鑒定及序列測定,證實構建正確.SDS-PAGE分析表明表達產物的相對分子質量與預期相符,表達量可占菌體總蛋白的66.15%.Western blot分析表明目的 蛋白具有較好的反應原性.ELISA試驗證實目的 蛋白能與陽性豬源和標準HEV血清發生反應.結論 已成功構建了豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白的pET28a-293原核表達載體,并得到了有效表達,為進一步建立豬源戊型肝炎的診斷方法奠定基礎.

作 者： 屈勇剛 朱光澤 金寧一 孫中鋒 于芳 劉玉生 胡寧寧 陸民 夏志平   作者單位： 屈勇剛(吉林大學畜牧獸醫學院,長春,130062;軍事醫學科學院十一所病毒室,長春,130062;石河子大學動物科技學院,石河子,832003)

朱光澤(長春中醫藥大學第一臨床附屬醫院,長春,130021)

金寧一,孫中鋒,于芳,劉玉生,胡寧寧,夏志平(軍事醫學科學院十一所病毒室,長春,130062)

陸民(吉林大學畜牧獸醫學院,長春,130062) 

刊 名： 中國生物制品學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2008 21(3)  分類號： Q786 R373.2  關鍵詞： 豬源戊型肝炎病毒   衣殼蛋白   原核表達   反應原性  

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