抗菌抗癌肽CM4N在大腸桿菌中的融合表達(dá)與活性鑒定

為探討內(nèi)含肽intein在抗菌肽表達(dá)與純化中的應(yīng)用,采用遞歸PCR法合成CM4末端添加Asn的基因CM4N,克隆至E.coli表達(dá)載體pTYB11中,構(gòu)建了與intein的C端融合的表達(dá)載體pTYYB11-CM4N.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)中進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá),融合蛋白intein-CM4N主要以可溶形式存在于胞內(nèi).利用載體中intein中的chitin結(jié)合域,將融合蛋白通過chitin親和層析一步純化,經(jīng)DTT誘導(dǎo)intein的自我切割活性,實(shí)現(xiàn)CM4N在親和柱上的切割與分離,透析凍干后得到了純度95%以上的重組CM4N.活性檢測(cè)結(jié)果顯示,重組CM4N具有抗大腸桿菌、沙門氏菌和K562腫瘤細(xì)胞的活性.研究認(rèn)為,內(nèi)含肽在抗菌肽的基因工程中可能具有重要的應(yīng)用前景.

作 者： 陳玉清 秋雯 焦波 張杰 張雙全 CHEN Yu-qing QIU Wen JIAO Bo ZHANG Jie ZHANG Shuang-quan   作者單位： 南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,江蘇省分子醫(yī)學(xué)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇南京210046  刊 名： 藥物生物技術(shù)  ISTIC 英文刊名： PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 15(3)  分類號(hào)： Q516  關(guān)鍵詞： 抗菌肽CM4   原核表達(dá)   intein融合   活性  

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