核-胞漿蛋白提取方法

時(shí)間：2023-05-01 06:31:46 資料我要投稿

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核-胞漿蛋白提取方法

核蛋白/胞漿蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品組成規(guī)格提取液A 提取液B 蛋白酶抑制劑混合物

說(shuō)明書(shū)

BB-3112-1

50T 10ml 10ml 250ul 1

BB-3112-2 100T 20ml 20ml 500ul 1

儲(chǔ)存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。

有效期：

一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

貝博核蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒提供配套試劑，適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動(dòng)物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、免疫共沉淀、酶活性測(cè)定等蛋白研究。

應(yīng)用示例：

1 2 3

圖片說(shuō)明：用核蛋白提取試劑盒提取大腸組織樣本的SDA-PAGE的電泳考染照片和Western照片。圖1泳道中1、2、3分別為Marker、胞漿蛋白、核蛋白樣本。圖2為以上樣品的GAPDH內(nèi)參的WB結(jié)果照片。

使用方法：

細(xì)胞蛋白提取

1. 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分別各加入2ul蛋白酶抑制劑

混合物，混勻后置冰上備用。

①

2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，

盡可能吸干，收集細(xì)胞。

3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每5-10×106中加入200μl冷的提取液 A，高速渦旋振蕩15秒或吹打混勻，置

冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。

5. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，16000×g條件下離心5分鐘。

6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80

℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7. 沉淀用PBS洗滌一次，然后在4℃，16000×g條件下離心5分鐘，棄上清。

②

8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。 9. 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。 10. 在4℃，16000×g條件下離心10分鐘。

11. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

③④

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

組織蛋白提取

1. 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分別各加入2ul蛋白酶抑制劑

混合物，混勻后置冰上備用。

①

2. 取適量組織樣本剪碎，加冷PBS，用組織勻漿器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體（或

用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。 3. 在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，棄上清。

4. 每20ul細(xì)胞壓積中加入200μl冷的提取液 A，高速渦旋振蕩15秒或吹打混勻，

置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋振蕩或吹打混勻。

5. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，16000×g條件下離心5分鐘。

6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請(qǐng)置于冰上或-80

℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7. 沉淀用PBS洗滌一次，然后在4℃，16000×g條件下離心5分鐘，棄上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。 9. 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋振蕩15秒。 10. 在4℃，16000×g條件下離心10分鐘。

11. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

②③

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)：

● Guang Yu, Tonghai Yan, Ye Feng et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease

Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）

● Xiaohui Yan,Tianjiao Lyu,Nan Jia et al. Huaier Aqueous Extract Inhibits Ovarian Cancer Cell Motility via the AKT/GSK3β/β-Catenin Pathway PLoS ONE 2013 （IF=4.092）

● Jinchun Qian, Fengrong Jiang, Bin Wang et al. Ophiopogonin D prevents

H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells

Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, （IF=3.014）

相關(guān)產(chǎn)品：

產(chǎn)品

總蛋白提取試劑盒核蛋白提取試劑盒 Bradford蛋白定量試劑盒 ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒細(xì)胞蛋白提取試劑盒組織蛋白提取試劑盒細(xì)菌蛋白提取試劑盒酵母蛋白提取試劑盒磷酸化蛋白提取試劑盒 SDS-PAGE凝膠配制試劑盒

產(chǎn)品號(hào) BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702

產(chǎn)品

磷酸化蛋白富集試劑盒膜蛋白提取試劑盒 BCA蛋白定量試劑盒蛋白Marker

細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒植物總蛋白提取試劑盒植物膜蛋白提取試劑盒蛋白酶抑制劑混合物磷酸酶抑制劑混合物 SDS-PAGE上樣Buffer

產(chǎn)品號(hào) BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703

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