Bcl-2基因轉染對骨髓間充質干細胞體外模擬缺血性損傷保護作用的實驗研究

目的 觀察Bcl-2基因轉染對骨髓間充質干細胞(MSCs)體外模擬缺血性損傷的保護作用,從而為下一步Bcl-2基因修飾的MSCs移植治療腦缺血的實驗研究奠定基礎.方法 采用密度梯度離心結合貼壁法分離、培養大鼠MSCs,對培養第5代的MSCs進行鑒定;用脂質體轉染法對MSCs行人Bel-2(hBcb2)基因轉染,轉染后用G418進行篩選,然后用免疫熒光細胞化學技術檢測其蛋白的表達;采用血清剝奪和缺氧(SOD)處理建立MSCs體外模擬缺血性損傷模型,通過流式細胞術和TUNEL原位細胞凋亡檢測評價轉染hBcl-2基因的MSCs和未轉染的MSCs的凋亡及存活情況.結果 密度梯度離心結合貼壁法能有效分離、純化大鼠MSCs,免疫組化檢測顯示培養的細胞CD44、CD71表達陽性,而CD45表達陰性;轉染hBcl-2基因的MSCs經G418篩選后有hBd-2蛋白的穩定、高效的表達;流式細胞術檢測顯示和MSCs相比,轉染hBcb2基因的MSCs在SOD后及9h凋亡細胞較少,存活細胞較多.TUNEL原位細胞凋亡檢測也顯示轉染hBcl-2基因的MSCs的凋亡明顯減少(P<0.05).結論 轉染hBcl-2基因的MSCs有其蛋白的穩定表達,hBcl-2基因轉染可對抗MSCs體外模擬缺血性損傷引起的細胞凋亡,從而具有保護性作用.

作 者： 張小喬 梅元武 張紅 鄭麗芳 郭遠瑾 徐江華   作者單位： 張小喬(鄖陽醫學院附屬十堰市太和醫院神經內科)

梅元武,張紅,鄭麗芳,郭遠瑾,徐江華(華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院神經內科,武漢,430022) 

刊 名： 卒中與神經疾病  ISTIC 英文刊名： STROKE AND NERVOUS DISEASES  年，卷(期)： 2008 15(3)  分類號： Q813 R743  關鍵詞： Bcl-2   基因轉染   骨髓間充質干細胞   缺血性損傷   保護作用  

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