B型肉毒毒素保護性抗原He在大腸桿菌中的可溶性高表達

目的:通過序列優化及表達條件改進,在大腸桿菌中高效可溶性表達B型肉毒毒素保護性抗原Hc(Bont/B-Hc).方法:對Bont/B-Hc基因片段優化,用大腸桿菌常用密碼子替換稀有密碼子,并將(G+C)含量由76.2%降至56.3%;人工合成多條具有重疊互補序列的寡核苷酸片段,采用重疊延伸PCR方法獲得了Bont/B-Hc的全長基因,并構建了原核可溶性表達載體;將經酶切和測序鑒定正確的重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞,用IPTG誘導Bont/B-Hc的表達并進行純化及Western印跡鑒定.結果和結論:目的蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得了可溶性高表達,占菌體裂解液上清總蛋白的26.7%,表達量達到30 mg/L,是目前國內外已知表達的最高水平;經Ni柱一步純化后,目的蛋白純度可達到80.3%,為肉毒毒素中和抗體的制備及亞單位疫苗的研究奠定了基礎.

作 者： 于蕊 王雙 余云舟 俞煒源 孫志偉 YU Rui WANG Shuang YU Yun-Zhou YU Wei-Yuan SUN Zhi-Wei   作者單位： 軍事醫學科學院,生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關鍵詞： B型肉毒毒素   保護性抗原He   可溶性高表達  

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