B型肉毒毒素保護(hù)性抗原He在大腸桿菌中的可溶性高表達(dá)

目的:通過序列優(yōu)化及表達(dá)條件改進(jìn),在大腸桿菌中高效可溶性表達(dá)B型肉毒毒素保護(hù)性抗原Hc(Bont/B-Hc).方法:對(duì)Bont/B-Hc基因片段優(yōu)化,用大腸桿菌常用密碼子替換稀有密碼子,并將(G+C)含量由76.2%降至56.3%;人工合成多條具有重疊互補(bǔ)序列的寡核苷酸片段,采用重疊延伸PCR方法獲得了Bont/B-Hc的全長(zhǎng)基因,并構(gòu)建了原核可溶性表達(dá)載體;將經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,用IPTG誘導(dǎo)Bont/B-Hc的表達(dá)并進(jìn)行純化及Western印跡鑒定.結(jié)果和結(jié)論:目的蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得了可溶性高表達(dá),占菌體裂解液上清總蛋白的26.7%,表達(dá)量達(dá)到30 mg/L,是目前國(guó)內(nèi)外已知表達(dá)的最高水平;經(jīng)Ni柱一步純化后,目的蛋白純度可達(dá)到80.3%,為肉毒毒素中和抗體的制備及亞單位疫苗的研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 于蕊 王雙 余云舟 俞煒源 孫志偉 YU Rui WANG Shuang YU Yun-Zhou YU Wei-Yuan SUN Zhi-Wei   作者單位： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號(hào)： Q78  關(guān)鍵詞： B型肉毒毒素   保護(hù)性抗原He   可溶性高表達(dá)  

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