人SM22α在巴斯德畢赤酵母中的表達、純化及抗體制備

目的:用酵母表達重組人平滑肌22α(SM22α)蛋白,制備兔抗人SM22α多克隆抗體.方法:利用PCR從pGEM3z-SM22α質粒擴增得到人SM22α基因編碼區,重組至pPIC9構建酵母表達載體,轉染巴斯德畢赤酵母,進行分泌型表達.表達產物經分步鹽析和CM-纖維素柱層析純化后,免疫家兔,制備兔抗人SM22α多克隆抗體.結果:所構建的pPIC9-SM22α酵母表達載體轉染酵母感受態細胞后,外源性SM22α可整合至酵母染色體中,經甲醇誘導84 h,可實現SM22α的高效表達與分泌.用70%硫酸銨處理上清液,收集沉淀進行離子交換層析純化后,經變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)可見一分子量為22 kD的單一區帶.用該純化產物免疫家兔制備的兔抗人SM22α抗血清可用于檢測人或大鼠血管壁中SM22α的表達水平.結論:重組人SM22α可在巴斯德畢赤酵母中進行高效表達與分泌,純化蛋白可用于抗體制備,為研究SM22α功能提供了檢測工具.

作 者： 溫進坤 聶磊 李靜宜 程云會 韓梅 WEN Jin-kun NIE Lei LI Jing-yi CHENG Yun-hui HAN Mei   作者單位： 河北醫科大學基礎醫學研究所,河北省醫學生物技術重點實驗室,河北,石家莊,050017  刊 名： 中國應用生理學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF APPLIED PHYSIOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q78  關鍵詞： 平滑肌22α   巴斯德畢赤酵母   分泌表達   抗血清  

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