生物技術制藥

題型與期中考試一樣，名詞解釋五個，單選15個，填空10個。簡答5個，論述題一個 期中卷子很多題目都是重點，要認真看。

第一章 緒論

論述題：：期中考試最后一題

第二章 基因工程制藥

1， 將所要重組的目的基因插入載體，拼接，轉入新的宿主細胞，

構建成工程菌或者細胞，實現遺傳物質的重新組合，并使目的基因在工程菌內進行復制和表達的技術。

2， 基因工程藥物制備的基本過程是：獲得母的基因---組建重組質粒---構建基因工程菌

（或者細胞）---培養工程菌---產物的分離純化---除菌過濾----半成品的檢定—成品的檢定---包裝

3， 目的基因的獲得三種方法：（1）反轉錄法（2）反轉錄-聚合酶鏈反應法（RT-PCR）

（3）化學合成法。

其中要掌握，反轉錄法中信使RNA的純化原理：由于真核細胞中信使RNA3,末端常含有Poly A,，流經寡聚dT柱，被特異性的結合，再用低鹽溶液洗脫下來。得純度較高的信使RNA。RT-PCR方法中要掌握其方法步驟是：變性、退火、延伸、再重復。化學合成法中主要限制是：不能合成太長的基因，同時費用較高、

4， 基因表達的宿主可以分為真核細胞（包括酵母。絲狀真菌）和原核細胞（包括大腸

桿菌，枯草芽孢桿菌，鏈霉菌）。

5， 重組工程菌的培養：1.分批培養（1）DO-Stat方法（2）Blanced DO-Stat方法（3）

控制菌體比生長速率方法2、補料分批培養3、連續培養4、透析培養5、固定化培養(簡答題)

6， 重組蛋白質的分離純化：主要依賴的是色譜分離方法，P50--60要掌握一下方法和

原理、優缺點！比如離子交換層析（原理是根據目的蛋白的電荷大小），親和層析，凝膠過濾層析（原理是根據目的蛋白的相對分子量，該方法耐壓，分離效率高，但是不耐高離子強度），反相色譜

第三章

7/、離體培養動物細胞的類型：（要掌握的是三個黑體的概念，考三者之一）（1）原代細胞（是指直接取自動物組織器官，經過粉碎、消化而獲得的細胞懸液）、（2）二倍體細胞系（是指元代細胞經過傳代，篩選、克隆，從而沖隊中細胞成分的組織中挑選并純化出某種具有一定特征的細胞株、特點：二倍體；有明顯的貼壁和接觸抑制特性；有限的增殖能力；無致瘤性）、（3）轉化細胞系（ 通過轉化形成，變成了異倍體，有無限增殖能力如：Vero。）（4）融合細胞系（掌握融合的方法：仙臺病毒融合法、聚乙二醇(又曰PEG)融合法、電融合法(5)基因工程細胞系

8、常用的細胞的特性，經典的例子：Namalwa細胞，是從淋巴瘤的患者體內獲取的，用于生產干擾素。Vero從非洲綠猴腎中分離，貼壁依賴的成纖維細胞，用于制備疫苗。

9．、動物細胞的培養條件：動物細胞最適合的pH值為7.2～7.4。哺乳動物細胞的最佳培養溫度為：(37±5)℃、昆蟲細胞：27℃。小牛血清5%---10%- (包括胎牛血清10%---20%)

10、細胞分離：常用的分離方法是酶消化法。

11、細胞計數：掌握血球計數法，為了判斷細胞的死活，我們使用的染料是臺盼藍和苯胺黑。重點掌握的是：MTT染色計數法。它的原理是活細胞中的線粒體脫氫酶能將淡黃色的MTT轉變成紫色的結晶沉淀，吸走的液體，把結晶放入脫色液（DMSO）有機溶劑中脫色，其色澤的深淺和活細胞的量 在590nm下比濁得到標準曲線，再根據標準

曲線求得相應比濁下的細胞數。（簡答）

12、細胞凍存和復蘇：慢凍速溶。

13、理想微載體的條件：（1）微載體表面性質與細胞有良好的相容性（2）無毒（3）材料是惰性的（4）比重合適（5）良好的光學透明性，最好是軟體的（6）耐高溫，能進行高壓蒸汽滅菌（7）原料廉價剪片可反復使用。（簡答）

37、包埋細胞的載體材料分三類：（1）人工合成的高分子聚合物（2）糖類（3）蛋白質

14、動物細胞的生物反應器：五種：機械攪拌生化反應器、氣升式生物反應器、中空纖維管生物反應器、透析袋或者膜式反應器、固定床式生物反應器（填空或者選擇題）

第四章 抗體制藥

15、單克隆抗體的概念和原理： 概念：只識別一種表位(抗原決定簇)的抗體，來自單個Ｂ淋巴細胞的克隆或一個雜交瘤細胞的克隆。原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的，不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術。

細胞二者的融合方法是PEG融合方法。用HAT培養基（成分是：次黃嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脫氧核苷（thymidin））

16、人-鼠嵌合抗體是指在基因水平上將小鼠的Ig可變區與人的Ig恒定區嵌合在一起 人改型抗體是指用鼠單克隆抗體V區的人源化 ，

小分子抗體包括：Fab與Fv抗體、單鏈抗體、單域抗體

17、噬菌體抗體庫技術的特點：⒈模擬天然全套抗體庫

⒉避開了人工免疫和雜交瘤技術

⒊可獲得高親和力的人源化抗體

18、基因工程抗體表達的方式：

⒈原核細胞表達

⒉真核細胞表達

⒊轉基因植物表達

⒋轉基因動物表達

19、免疫標記技術用的抗體類試劑：熒光抗體診斷試劑、免疫酶抗體診斷試劑、放射免疫用抗體診斷試劑

第五章 植物細胞制藥

20.是指植物的每個細胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發育成完整植株的遺傳能力。

21、外植體：用于植物組織（細胞）培養的器官或組織（的切段），植物的各部位如根、莖、葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進行組織培養, 誘發產生愈傷組織。

38、培養植物細胞過程中，生物量積累最大的是對數期，次級代謝產物最多的是穩定期

22、植物細胞與動物細胞的三大區別：葉綠體，液泡，細胞壁、

23、初級代謝產物：比如激素、次級代謝產物：比如多糖、

25、氮常以銨鹽或硝酸鹽形式提供

碳源分為二種：光自養培養物的是二氧化碳。異養培養物的主要是糖類。

26、兩步培養法： 第一步使用適合細胞生長的培養基，營養豐富；第二步使用適于次級代謝產物合成的培養基，較低含量的硝酸鹽和磷酸鹽，并含有較低的糖分或少量的碳源。（第一個用于細胞生物量的累積，第二個用于次級代謝產物的生產）（簡答）

27、植物細胞培養的生物反應器 1機械攪拌式生物反應器2鼓泡塔生物反應器3氣升式生物反應器4轉鼓式生物反應器（最優）5固定化細胞生物反應器（培養時考慮剪切力的影響，最終目的是得到次級代謝產物）

28、前提飼喂是增加次級代謝產物產率的方法，依賴于三種結構單位：1莽草酸2氨基酸3乙酸

第六章 酶工程制藥

29、固定化酶：是指限制或固定于特定空間位置的酶，具體是指經物理或者化學方法處理，使酶變成不易隨水流失即運動受到限制，而又能發揮酶催化作用的酶制劑。

30、酶固定化方法可以分為三種：載體結合法（包括物理吸附法、離子結合法、共價結合法）、交聯法、包埋法（包括網格型和微囊型）。交聯法用的交聯劑試劑是戊二醛

31、固定化細胞：是指被限制或定位于特定空間位置的細胞。

32、：是指根據酶的作用原理，人工的合成具有酶性質的催化劑，必須有一個底物結合的位點和一個催化位點。

33、模擬酶中最具有典型代表性的是環糊精。

第七章 發酵工程技術

34、發酵后工業的生產水平取決于三個要素：生產軍中，發酵工藝，發酵設備。

35、發酵的基本過程是：菌種—種子制備—發酵---發酵液的預處理---提取精制

36、谷氨酸生產中使用的菌種是：谷氨酸棒狀桿菌。

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