維甲酸受體β基因RNAi表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其對A549細(xì)胞增殖和分化的影響

目的:利用RNA干擾(RNAi)技術(shù),構(gòu)建針對維甲酸受體(RAR)β基因的小干擾RNA(siRNA)表達(dá)質(zhì)粒,誘導(dǎo)RARβ基因沉默,并觀察其對肺癌細(xì)胞A549株的細(xì)胞周期和增殖的影響.方法:依據(jù)設(shè)計(jì)siRNA的原則,針對人RARβ的mRNA序列,設(shè)計(jì)并合成編碼siRNA的2條寡核苷酸序列,經(jīng)退火成互補(bǔ)雙鏈,再克隆到pSUPER-NEO-GFP真核表達(dá)載體中構(gòu)建重組體pSUPER-RARβ,轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞中,以空質(zhì)粒和RARβ高表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染為對照,用Western印跡檢測RARβ基因的表達(dá),并采用MTT試驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞株的增殖和細(xì)胞分化情況.結(jié)果:表達(dá)人類RARβ基因的siRNA重組表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功;MTT試驗(yàn)結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染的A549-RARβ-si細(xì)胞增殖能力降低.結(jié)論:采用RNAi技術(shù)特異阻斷RARβ基因表達(dá),通過轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,可使其細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,并抑制其細(xì)胞生長.

作 者： 林嬋 王力 邊六交 LIN Chan WANG Li BIAN Liu-Jiao   作者單位： 林嬋,邊六交,LIN Chan,BIAN Liu-Jiao(西北大學(xué),基因工程中心,陜西,西安,710069)

王力,WANG Li(中國科學(xué)院,上海生命科學(xué)院研發(fā)中心,上海,200233) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78 Q25  關(guān)鍵詞： 維甲酸受體β   RNA干擾   A549細(xì)胞   基因表達(dá)抑制  

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