50L規模中試發酵重組核苷二磷酸激酶A工程菌

中試規模發酵重組人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)工程菌,并對表達產物進行純化.搖瓶培養一級種子至合適密度,以10%比例接種二級種子培養基,在7L發酵罐中培養至OD600為9.6～10.5,然后轉入80L發酵罐中進行補料分批培養,所得菌體裂解后,經離子交換層析和親和層析兩步純化得重組蛋白制品.結果表明,50L培養液經過10h培養后,濕菌收量為1560g/批,NDPK-A表達量為23.8%.另外,補料方式對發酵密度有明顯影響.與單純補加碳源相比,同時補加碳源和氮源可以顯著提高菌體產量,但對目的蛋白表達量的提高不明顯.在較優條件下,菌體產量為(2220.00±169.71)g/批,蛋白表達量為(22.00±0.42)%,純化后重組蛋白得率為510mg/L.產物可溶、密度適中、工藝簡便的中試發酵條件的建立為高得率、大規模制備重組rhNDPK-A奠定了基礎.

作 者： 熊盛 錢垂文 黃立 劉秋英 張美英 王一飛 XIONG Sheng QIAN Chui-wen HUANG Li LIU Qiu-ying ZHANG Mei-ying WANG Yi-fei   作者單位： 熊盛,錢垂文,XIONG Sheng,QIAN Chui-wen(暨南大學藥學院,廣州,510630;暨南大學生物醫藥研究開發基地,廣州,510630)

黃立,劉秋英,張美英,王一飛,HUANG Li,LIU Qiu-ying,ZHANG Mei-ying,WANG Yi-fei(暨南大學生物醫藥研究開發基地,廣州,510630) 

刊 名： 中國生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(10)  分類號： Q93  關鍵詞： 核苷二磷酸激酶   中試   發酵   純化  

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