層理鞭枝藻藻藍蛋白和藻紅藍蛋白β亞基Cys-155的藻膽色素共價偶聯

層理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus PCC7603)藻藍蛋白β-CPC和藻紅藍蛋白β-PEC中均存在2個藻膽色素結合位點(cys-84和Cys-155),可與藻藍膽素(簡稱PCB)發生共價偶聯反應,已有研究證實編碼基因為alr0617的裂合酶CpcS1是催化Cys-84與PCB共價偶聯的裂合酶.在研究Cys-155與PCB共價偶聯的過程中,通過BLAST軟件同源性對比分析后,篩選出4個基因:cpcT1、cpcT2、cpcS1、cpcS,其中基因cpcT1和cpcS2,利用分子克隆的技術,根據實驗需要轉到載體pCDFDuet上,通過DNA電泳和蛋白質電泳挑選出正確的克隆.此4個基因對應的質粒與在大腸桿菌內生成PCB必需的質粒pACYCDuet-hol-pcyA,以及質粒pET-cpcB(C84S)或pET-pecB(C84A),共同轉入大腸桿菌BL21(DE3)內,進行體內重組,得到各重組蛋白,經過親和層析柱提純并透析,過濾掉金屬離子,純化透析后的蛋白經過活性比較、蛋白質電泳以及鋅染色、蛋白質變性等試驗以及熒光和紫外吸收光譜等鑒定,通過與相應文獻中PCB光譜的比對,確定編碼基因為all5339的裂合酶CpcT1能高效地催化Cys-155與PCB共價偶聯,而其余3個基因不能起到催化作用.由此,能催化脫輔基蛋白β-CPC和β-PEC的兩個位點共價偶聯PCB的裂合酶均被發現.實驗對于研究藻膽蛋白的生物合成、光合作用捕光機理以及藻膽體的組裝等有重要的意義.

作 者： 張娟 周可澄 夏坤 周明 ZHANG Juan ZHOU Ke-Cheng XIA Kun ZHOU Ming   作者單位： 張娟,周可澄,夏坤,ZHANG Juan,ZHOU Ke-Cheng,XIA Kun(華中科技大學環境科學與工程學院,武漢,430074)

周明,ZHOU Ming(華中農業大學生命科學技術學院,武漢,430070) 

刊 名： 水生生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2010 34(2)  分類號： Q344~+.14  關鍵詞： 藻藍蛋白β-CPC   藻紅藍蛋白β-PEC   裂合酶CpcT1   體內重組   β-CPC   β-PEC Lyase CpeT1   Reconstitution in vivo  

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