呋喃丹降解菌CDS-1的雙標(biāo)記菌株的構(gòu)建

用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS-1的基因組DNA,將所得DNA片段與BamHⅠ酶切的啟動子探針載體pRobe-GFP酶連后轉(zhuǎn)化E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞,在選擇性平板上培養(yǎng),從大約1×104個菌落中篩選到50個含啟動子片段的陽性克隆.挑選其中一個發(fā)光強(qiáng)度最強(qiáng)的陽性克隆F7,將它的重組質(zhì)粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ雙酶切后得到包含sphingomonas sp.CDS-1啟動子和gfp基因的DNA片段,將該片段克隆到廣宿主載體pPZP201上,得到pPZP201-gfp質(zhì)粒.將pPZP201-gfp通過三親接合轉(zhuǎn)移至Sphingomonas sp.CDS-1中得到GFP標(biāo)記菌株CDS-gfp,經(jīng)熒光顯微鏡觀察,gfp基因在CDS-gfp中表達(dá)量很高.對標(biāo)記菌株進(jìn)行連續(xù)傳代10次(48h/次),發(fā)現(xiàn)pPZP201-gfp依然存在,而且發(fā)光明顯.通過Not Ⅰ酶切位點(diǎn)把linA基因連接到pUT/mini-Tn5上構(gòu)建新的轉(zhuǎn)座子載體pUT/mini-Tn5-linA.以pRK600為輔助質(zhì)粒將pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通過轉(zhuǎn)座作用,插入到CDS-gfp的染色體中,得到雙標(biāo)記菌株CDS-GFP-LinA.該菌株是一株能同時降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的結(jié)果為研究Sphingomonas sp.CDS-1的生態(tài)學(xué)行為奠定了基礎(chǔ).

作 者： 徐劍宏 武俊 洪青 張志琳 李順鵬 王云端 XU Jian-hong WU Jun HONG Qing ZHANG Zhi-lin LI Shun-peng WANG Yun-duan   作者單位： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)環(huán)境微生物工程重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,南京,210095  刊 名： 微生物學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(4)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： Sphingomonas sp.CDS-1   呋喃丹   降解   雙標(biāo)記   基因工程菌  

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