重組大腸桿菌BL21-pET28a(+)-ADH誘導(dǎo)表達(dá)羰基還原酶的條件優(yōu)化與應(yīng)用

目的:對重組大腸桿菌E.coli BL21-pET28a(+)-ADH表達(dá)羰基還原酶的條件進(jìn)行優(yōu)化,以增加目的蛋白的表達(dá)量,提高生物合成(S)-3,5-雙三氟甲基苯乙醇的轉(zhuǎn)化率.方法:將重組質(zhì)粒pET28a(+)-ADH轉(zhuǎn)化E.coli BL21后,對誘導(dǎo)過程產(chǎn)生影響的4個因素,誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)劑濃度及搖菌轉(zhuǎn)數(shù),利用SPSS統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行正交實驗設(shè)計,并對實驗結(jié)果進(jìn)行直觀分析及方差分析,對實驗得出的最佳搭配誘導(dǎo)條件進(jìn)行驗證.結(jié)果:直觀分析中誘導(dǎo)溫度的R值最大,其次為搖菌轉(zhuǎn)數(shù)和誘導(dǎo)劑IPTG濃度,誘導(dǎo)時間的R值最小;方差分析表明誘導(dǎo)溫度的P值小于0.05,而搖菌轉(zhuǎn)數(shù)、IPTG濃度及時間因素的P值均大于0.05.利用優(yōu)化后的菌種生物合成(S)-3,5-雙三氟甲基苯乙醇,轉(zhuǎn)化率達(dá)到95.16%.結(jié)論:本實驗的最優(yōu)誘導(dǎo)條件為,誘導(dǎo)溫度25℃、誘導(dǎo)搖菌轉(zhuǎn)數(shù)200r·min-1、誘導(dǎo)劑IPTG濃度0.5mmol·L-1、誘導(dǎo)時間6h.且重組菌對于(S)-3,5-雙三氟甲基苯乙醇的轉(zhuǎn)化率達(dá)到95.16%.

作 者： 李莉 張芳 羅晨 闞靜 王旻   作者單位： 李莉,羅晨,闞靜,王旻 (中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,南京,210009)

張芳(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生物制藥教研室,南京,210046) 

刊 名： 藥學(xué)與臨床研究  ISTIC 英文刊名： PHARMACEUTICAL AND CLINICAL RESEARCH  年，卷(期)： 2010 18(2)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 羰基還原酶   條件優(yōu)化   正交試驗   直觀分析   方差分析   生物轉(zhuǎn)化  

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