幽門螺桿菌HP0762蛋白的原核表達純化及多克隆抗體制備

目的:表達和純化幽門螺桿菌HP0762蛋白,并制備該蛋白的多克隆抗體.方法:從幽門螺桿菌SS1中經PCR擴增得到了hp0762基因,將其克隆至含有6xHis編碼序列的原核表達載體pET-28a(+)中,再將重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),在IPTG誘導下進行蛋白表達;用HiTrap Chelating HP親和柱純化重組蛋白,Western印跡進一步鑒定;以純化后的蛋白為抗原免疫新西蘭大耳白兔,制備該蛋白的多克隆抗體;用EUSA和Western印跡檢測抗血清.結果:目的蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得了可溶性表達,純化后純度可達90%以上;制備了針對HP0762重組蛋白的抗血清,抗體ELISA效價為1:256 000,Western印跡分析表明該抗體能特異性識別內源性HP0762.結論:完成了HP0762蛋白的原核高效表達與純化,并制備了其高效價的多克隆抗體,為進一步對其進行疫苗研制與基因功能研究奠定了基礎.

作 者： 李叢勝 邱炎 王艷春 韓秀萍 陶好霞 徐興然 劉純杰 LI Cong-Sheng QIU Yan WANG Yan-Chun HAN Xiu-Ping TAO Hao-Xia XU Xing-Ran LIU Chun-Jie   作者單位： 李叢勝,LI Cong-Sheng(西南大學,藥學院,重慶,400716;軍事醫學科學院,生物工程研究所,病原微生物與生物安全國家重點實驗室,北京,100071)

邱炎,王艷春,韓秀萍,陶好霞,劉純杰,QIU Yan,WANG Yan-Chun,HAN Xiu-Ping,TAO Hao-Xia,LIU Chun-Jie(軍事醫學科學院,生物工程研究所,病原微生物與生物安全國家重點實驗室,北京,100071)

徐興然,XU Xing-Ran(西南大學,藥學院,重慶,400716) 

刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分類號： Q78  關鍵詞： 幽門螺桿菌   HP0762蛋白   原核表達   多克隆抗體  

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