真菌的分子鑒定

內生真菌(Endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某一段時期生活在植物組織內，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。近年來的研究表明，內生真菌可以產生與宿主相同或相似的代謝產物，對相應的內生真菌及其代謝產物的研究已經成為尋找藥物來源的一種新途經。 本文以我國特有藥用植物——喜樹(CamptothecaacuminataDecne.)為實驗材料，對喜樹內生真菌的組織分布及分離方法進行初步研究。實驗結果表明，內生真菌分離的表面消毒以75%酒精和0.1%升汞結合的方法較好。對喜樹的根部和莖部的升汞消毒時間以4～5min為宜，喜樹葉子的升汞消毒時間應控制在2min左右。在所試條件下共計分離得到70株內生真菌，主要分布在樹葉(42.9%)和皮部(35.7%)，根部(14.3%)和種子(7.1%)中的內生真菌數目較少，在木質部未分離到內生真菌。 采用形態學和分子生物學結合的方法對所得菌株進行鑒定。應用形態學方法共鑒定出6株內生真菌，分布于6屬。按照培養特征，把所得內生真菌歸為27個形態類群。選取不同形態類群中的代表菌株，擴增并測定其rDNAITS區段的DNA序列，結合內生真菌與GenBank中參考菌株堿基序列相似性和系統發育關系分析，確定其分類地位。共獲得18株內生真菌的ITS序列，分析結果表明，這18株內生真菌分屬于2個亞門，4綱，8目，8科，14屬;形態學鑒定與分子生物學鑒定結果一致。鑒定結果在一定程度上反應了喜樹生態系內生真菌的生物多樣性。在本研究中，共分離得到18株擬莖點霉屬(Phomopsis)菌株，占25.7%，為優勢菌群，對其進行了基于ITS區段的系統發育分析。 本文采用薄層層析TLC方法與高效液相色譜HPLC法，從3株內生真菌CZ-14、CZ-17、CZ-18的發酵產物中檢出喜樹堿，含量為0.03-0.04mg/g。發酵產物是以喜樹種子煎汁液體培養基培養。

內生真菌(Endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某一段時期生活在植物組織內，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。近年來的研究表明，內生真菌可以產生與宿主相同或相似的代謝產物，對相應的內生真菌及其代謝產物的研究已經成為尋找藥物來源的一種新途經。 本文以我國特有藥用植物——喜樹(CamptothecaacuminataDecne.)為實驗材料，對喜樹內生真菌的組織分布及分離方法進行初步研究。實驗結果表明，內生真菌分離的表面消毒以75%酒精和0.1%升汞結合的方法較好。對喜樹的根部和莖部的升汞消毒時間以4～5min為宜，喜樹葉子的升汞消毒時間應控制在2min左右。在所試條件下共計分離得到70株內生真菌，主要分布在樹葉(42.9%)和皮部(35.7%)，根部(14.3%)和種子(7.1%)中的內生真菌數目較少，在木質部未分離到內生真菌。 采用形態學和分子生物學結合的方法對所得菌株進行鑒定。應用形態學方法共鑒定出6株內生真菌，分布于6屬。按照培養特征，把所得內生真菌歸為27個形態類群。選取不同形態類群中的代表菌株，擴增并測定其rDNAITS區段的DNA序列，結合內生真菌與GenBank中參考菌株堿基序列相似性和系統發育關系分析，確定其分類地位。共獲得18株內生真菌的ITS序列，分析結果表明，這18株內生真菌分屬于2個亞門，4綱，8目，8科，14屬;形態學鑒定與分子生物學鑒定結果一致。鑒定結果在一定程度上反應了喜樹生態系內生真菌的生物多樣性。在本研究中，共分離得到18株擬莖點霉屬(Phomopsis)菌株，占25.7%，為優勢菌群，對其進行了基于ITS區段的系統發育分析。 本文采用薄層層析TLC方法與高效液相色譜HPLC法，從3株內生真菌CZ-14、CZ-17、CZ-18的發酵產物中檢出喜樹堿，含量為0.03-0.04mg/g。發酵產物是以喜樹種子煎汁液體培養基培養。

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