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Spl基因RNA干擾載體的構(gòu)建及鑒定
目的:構(gòu)建干擾載體pSilencer 3.1-spl,并初步研究其對(duì)Spl基因的干擾作用.方法:根據(jù)Spl cDNA編碼序列,設(shè)計(jì)并合成針對(duì)Spl基因的特異性RNA干擾片段,并將其克隆入pSilencer 3.1-Hl neo干擾載體中,構(gòu)建Spl基因小干擾RNA(siRNA)真核表達(dá)載體pSilencer 3.1-Spl;分別將陰性對(duì)照載體pSilencer 3.1與重組載體pSilencer 3.1-Spl經(jīng)脂質(zhì)體LipofectAMINE2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,采用RT-PCR、Western blot方法分別檢測(cè)Spl基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)水平.結(jié)果:構(gòu)建了Spl基因siRNA真核表達(dá)載體pSilencer 3.1-Spl,經(jīng)酶切、測(cè)序鑒定證實(shí)克隆正確,并在mRNA水平和蛋白水平證實(shí)了載體的干擾效果.結(jié)論:特異性siRNA能明顯抑制Spl基因在HeLa細(xì)胞中的表達(dá),為進(jìn)一步研究Spl的生物學(xué)功能和作用機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).
作 者： 曲璇 陳蘇寧 吳琳 申亮亮 林偉 趙華棟 劉新平 張健 QU Xuan CHEN Su-Ning WU LinSHEN Liang-Liang LIN Wei ZHAO Hua-Dong LIU Xin-Ping ZHANG Jian 作者單位： 曲璇,吳琳,申亮亮,林偉,趙華棟,劉新平,張健,QU Xuan,WU LinSHEN,Liang-Liang,LIN Wei,ZHAO Hua-Dong,LIU Xin-Ping,ZHANG Jian(第四軍醫(yī)大學(xué),基礎(chǔ)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,國家腫瘤生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,陜西,西安,710032)陳蘇寧,CHEN Su-Ning(第四軍醫(yī)大學(xué),基礎(chǔ)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,國家腫瘤生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,西京醫(yī)院藥劑科,陜西,西安,710032)
刊 名： 生物技術(shù)通訊 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2008 19(4) 分類號(hào)： Q78 關(guān)鍵詞： RNA干擾 Spl基因 小干擾RNA【Spl基因RNA干擾載體的構(gòu)建及鑒定】相關(guān)文章：
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