Spl基因RNA干擾載體的構建及鑒定

目的:構建干擾載體pSilencer 3.1-spl,并初步研究其對Spl基因的干擾作用.方法:根據Spl cDNA編碼序列,設計并合成針對Spl基因的特異性RNA干擾片段,并將其克隆入pSilencer 3.1-Hl neo干擾載體中,構建Spl基因小干擾RNA(siRNA)真核表達載體pSilencer 3.1-Spl;分別將陰性對照載體pSilencer 3.1與重組載體pSilencer 3.1-Spl經脂質體LipofectAMINE2000介導轉染HeLa細胞,采用RT-PCR、Western blot方法分別檢測Spl基因的轉錄與表達水平.結果:構建了Spl基因siRNA真核表達載體pSilencer 3.1-Spl,經酶切、測序鑒定證實克隆正確,并在mRNA水平和蛋白水平證實了載體的干擾效果.結論:特異性siRNA能明顯抑制Spl基因在HeLa細胞中的表達,為進一步研究Spl的生物學功能和作用機制奠定了實驗基礎.

作 者： 曲璇 陳蘇寧 吳琳 申亮亮 林偉 趙華棟 劉新平 張健 QU Xuan CHEN Su-Ning WU LinSHEN Liang-Liang LIN Wei ZHAO Hua-Dong LIU Xin-Ping ZHANG Jian   作者單位： 曲璇,吳琳,申亮亮,林偉,趙華棟,劉新平,張健,QU Xuan,WU LinSHEN,Liang-Liang,LIN Wei,ZHAO Hua-Dong,LIU Xin-Ping,ZHANG Jian(第四軍醫大學,基礎部生物化學與分子生物學教研室,國家腫瘤生物學重點實驗室,陜西,西安,710032)

陳蘇寧,CHEN Su-Ning(第四軍醫大學,基礎部生物化學與分子生物學教研室,國家腫瘤生物學重點實驗室,西京醫院藥劑科,陜西,西安,710032) 

刊 名： 生物技術通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(4)  分類號： Q78  關鍵詞： RNA干擾   Spl基因   小干擾RNA  

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