糞腸球菌Ace重組蛋白的表達、純化及黏附活性研究

構(gòu)建含糞腸球菌表面蛋白Ace保守序列A的重組載體,在大腸埃希菌M15中進行誘導(dǎo)表達、純化表達產(chǎn)物,研究其黏附活性.以糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)株JB2-2為模板進行PCR擴增ace基因保守序列A,構(gòu)建重組質(zhì)粒pQE30/Ace,轉(zhuǎn)化至表達宿主菌M15中進行誘導(dǎo)表達,利用SDS-PAGE和Western blot進行分析和鑒定表達結(jié)果,Ni-NTA親和層析柱純化重組蛋白,同時用純化的Ace重組蛋白免疫新西蘭兔,用所得相應(yīng)的抗血清分別進行黏附和黏附抑制實驗.結(jié)果可見,構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和測序鑒定證明其中插入片段為ace基因保守序列A,測序結(jié)果與Genbank上登錄序列完全一致;SDS-PAGE分析顯示,重組工程菌表達了一相對分子質(zhì)量(Mr)約為37 ku的目的蛋白條帶,Western blot檢測其能與6×His單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng).糞腸球菌JH2-2能夠黏附于膠原蛋白Ⅰ表面;抗Ace多克隆抗體可抑制46℃培養(yǎng)的JH2-2對膠原蛋白Ⅰ的黏附,這種抑制作用與其稀釋度呈負相關(guān).構(gòu)建的原核表達載體pQE30/Ace在E.coli M15中成功地表達,純化的重組Ace蛋白具有膠原黏附活性.

作 者： 武楠 顏向軍 劉亞琴 鄒禮衡 楊祚升 WU Nan YAN Xiang-jun LIU Ya-qin ZOU Li-heng YANG Zuo-sheng   作者單位： 武楠,楊祚升,WU Nan,YANG Zuo-sheng(南華大學(xué),附屬第一醫(yī)院檢驗科,湖南,衡陽,421001)

顏向軍,劉亞琴,鄒禮衡,YAN Xiang-jun,LIU Ya-qin,ZOU Li-heng(南華大學(xué),附屬第一醫(yī)院血液科,湖南,衡陽,421001) 

刊 名： 微生物學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MICROBIOLOGY  年，卷(期)： 2008 28(3)  分類號： Q939.93  關(guān)鍵詞： 糞腸球菌   Ace   重組蛋白   蛋白純化   黏附  

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