基于XcmⅠ酶切的高效TA克隆載體的構(gòu)建

目的:制備基于Xcm Ⅰ酶切的高效TA克隆載體,并檢測其克隆PCR產(chǎn)物的效果.方法:設(shè)計一對互補配對的寡核苷酸,經(jīng)過變性及退火后插入質(zhì)粒pUC19的多克隆位點,從而在該多克隆位點中引入2個Xcm Ⅰ酶切位點,用Xcm Ⅰ酶切后即獲得含有3'突出T堿基的T載體;為了提高該T載體的克隆效率,優(yōu)化了2個Xcm Ⅰ酶切位點之間的堿基數(shù)目,排除了載體自連產(chǎn)生白色克隆的可能性,使假陽性大大減少;此外,為了便于完全酶切與未完全酶切載體的分離,在2個Xcm Ⅰ之間插入了一段無關(guān)DNA片段.結(jié)果:改進(jìn)得到的T載體可以有效克隆PCR產(chǎn)物,其陽性克隆率可達(dá)95%.結(jié)論:構(gòu)建了基于XcmⅠ酶切的TA克隆載體,經(jīng)過改進(jìn)的T載體具有很高的克隆效率.

作 者： 顧頠 張昕 安小平 陳錦輝 劉大斌 張寶中 周育森 童貽剛 GU Wei ZHANG Xin AN Xiao-Ping CHEN Jin-Hui LIU Da-Bin ZHANG Bao-Zhong ZHOU Yu-Sen TONG Yi-Gang   作者單位： 顧頠,GU Wei(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全國家重點實驗室,北京,100071;濟(jì)南軍區(qū)聯(lián)勤部,疾病預(yù)防控制中心,山東,濟(jì)南,250014)

張昕,安小平,陳錦輝,劉大斌,張寶中,周育森,童貽剛,ZHANG Xin,AN Xiao-Ping,CHEN Jin-Hui,LIU Da-Bin,ZHANG Bao-Zhong,ZHOU Yu-Sen,TONG Yi-Gang(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,微生物流行病研究所,病原微生物生物安全國家重點實驗室,北京,100071) 

刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： T載體   限制性內(nèi)切酶XcmⅠ   聚合酶鏈反應(yīng)  

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