CHO細胞高效表達載體的優化

目的:研究分析中國倉鼠EF1-α基因的轉錄調控序列,以構建新型高效表達載體.方法:利用常規分子生物學技術,構建了一系列基于CHEF1-α基因的非翻譯區調控序列元件的新型真核表達載體.以組織型纖溶酶原激活劑突變體(k2tPA)作為報告基因,利用本室已建立的CHO-dhfr--Z+定點整合表達系統比較載體表達外源基因的能力,挑選表達量高的載體.進一步添加翻譯增強子(H213及V163)序列,再進行評價.結果:CHEF1-α5'UTR及啟動子+3'UTR 1.65 kb、CHEF1-α5'UTR及啟動子+3'UTR 2.7 kb這2種組合均可有效提高目的基因tPA的表達,表達效率與對照載體相比分別提高了65.9%和54.5%.在添加翻譯增強子V163后,載體pMCEdEF53Ⅲ-163frt-k2tPA的表達效率為對照載體的2.65倍.結論:該載體系統在重組蛋白藥物的研發方面具有良好的應用前景.

作 者： 劉珊 劉志剛 張國強 俞煒源 LIU Shan LIU Zhi-Gang ZHANG Guo-Qiang YU Wei-Yuan   作者單位： 軍事醫學科學院生物工程研究所,北京,100071  刊 名： 軍事醫學科學院院刊  ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 30(4)  分類號： Q786  關鍵詞： CHEF1-α基因   CHO/dhfr-細胞   基因表達   組織型纖溶酶原激活物  

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