核受體相關(guān)因子1表達(dá)下調(diào)對(duì)多巴胺能細(xì)胞酪氨酸羥化酶和神經(jīng)突起生長(zhǎng)的影響

將合成的核受體相關(guān)因子1(nuclear receptor-relatedfactor 1,Nurr1)特異性短發(fā)夾寡核苷酸(small-hairpin RNA,shRNA)序列插入真核表達(dá)載體pSilenCircle(pSC),構(gòu)建Nurr1基因特異性shRNA真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)多巴胺能神經(jīng)前體細(xì)胞系MN9D,分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot方法檢測(cè)其對(duì)MN9D細(xì)胞內(nèi)源Nurr1的干擾作用及其對(duì)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表達(dá)的影響,并在倒置顯微鏡下觀察MN9D細(xì)胞神經(jīng)突起生長(zhǎng)的情況,探討Nurr1 shRNA表達(dá)載體對(duì)多巴胺能細(xì)胞表型標(biāo)記物TH和以神經(jīng)突起延長(zhǎng)為特征的細(xì)胞成熟的影響.結(jié)果表明,脂質(zhì)體組細(xì)胞和轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)粒的MN9D細(xì)胞內(nèi)Nurr1、TH的表達(dá)正常,而轉(zhuǎn)染Nurr1 shRNA真核表達(dá)載體(pSC-N1和pSC-N2)的MN9D細(xì)胞內(nèi)Nurr1和TH的mRNA水平明顯降低,Nurr1 mRNA的下降率分別為62.3%和45.6%,TH mRNA的下降率分別為76.3%和62.6%.同時(shí)Nurr1和TH蛋白的表達(dá)亦明顯下調(diào),Nurr1蛋白的下降率分別為57.4%和72.0%,TH蛋白的下降率分別為79.1%和70.1%.另外,轉(zhuǎn)染Nurr1 shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒的MN9D細(xì)胞神經(jīng)突起延長(zhǎng)有所減少,但是與正常細(xì)胞無(wú)明顯差異.結(jié)果提示:Nurr1 shRNA真核表達(dá)載體能顯著下調(diào)MN9D細(xì)胞內(nèi)源Nurr1和TH mRNA和蛋白的表達(dá),同時(shí)可能對(duì)MN9D細(xì)胞的神經(jīng)突起延長(zhǎng)有一定的抑制作用.Nurr1 shRNA表達(dá)載體的成功構(gòu)建為多巴胺能神經(jīng)元發(fā)育以及帕金森病相關(guān)基因的功能研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 吳云成 蔡友慶 趙永波 費(fèi)儉 WU Yun-Cheng CAI You-Qing ZHAO Yong-Bo FEI Jian   作者單位： 吳云成,趙永波,WU Yun-Cheng,ZHAO Yong-Bo(上海市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科、臨床神經(jīng)生化研究室,上海,200080)

蔡友慶,費(fèi)儉,CAI You-Qing,FEI Jian(中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所,上海,200031) 

刊 名： 生理學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA PHYSIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 58(4)  分類號(hào)： Q4  關(guān)鍵詞： 核受體相關(guān)因子1   酪氨酸羥化酶   RNA干擾   帕金森病   發(fā)育   神經(jīng)突起  

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