喙尾琵甲DNA提取方法比較與AFLP反應(yīng)體系的建立

采用CTAB法、改進(jìn)SDS-蛋白酶K法、SDS-飽和氯化鈉法和提取試劑盒對(duì)喙尾琵甲的肌肉、蟲(chóng)卵和幼蟲(chóng)進(jìn)行DNA提取,比較了DNA的提取和保存質(zhì)量,并對(duì)AFLP試驗(yàn)的酶切時(shí)間、預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋倍數(shù)和選擇性擴(kuò)增引物量等關(guān)鍵因子進(jìn)行試驗(yàn)和優(yōu)化.結(jié)果表明:4種方法對(duì)肌肉組織提取的DNA質(zhì)量都較好;3種傳統(tǒng)方法提取的DNA的保存時(shí)間長(zhǎng)于試劑盒提取的DNA;使用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ內(nèi)切酶組合,10 U EcoR Ⅰ和2 U Mse Ⅰ分兩步各酶切2 h,T4連接酶3 h連接后,以20倍稀釋的預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物和5 ng/35 ng的E+3/M+3引物量進(jìn)行選擇性擴(kuò)增,建立了喙尾琵甲AFLP分子標(biāo)記體系.

作 者： 趙敏 馮穎 和銳 陳曉鳴 冀煥紅 ZHAO Min FENG Ying HE Rui CHEN Xiao-ming JI Huan-hong   作者單位： 中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲(chóng)研究所,國(guó)家林業(yè)局資源昆蟲(chóng)培育與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南,昆明,650224  刊 名： 林業(yè)科學(xué)研究  ISTIC PKU 英文刊名： FOREST RESEARCH  年，卷(期)： 2010 23(2)  分類(lèi)號(hào)： Q963  關(guān)鍵詞： 喙尾琵甲   基因組DNA   DNA提取   AFLP   Blaps rhynchopetera   genomic DNA   DNA extraction   AFLP  

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