獐ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化及引物篩選

利用正交試驗(yàn)L16(45)對(duì)影響獐(Hydropotes inermis)ISSR-PCR反應(yīng)的Taq DNA聚合酶濃度、dNTP濃度、引物濃度、Mg2+濃度及模板DNA濃度5個(gè)因素在4個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化,同時(shí)對(duì)退火溫度進(jìn)行梯度PCR反應(yīng),以建立適合于獐ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系.最終確定獐25μL ISSR-PCR反應(yīng)體系為:Taq酶1.25 U·25μL-1、Mg2+濃度2.5 mmol·L-1、引物濃度0.3 μmol·L-1、DNA模板量350 ng·25μL-1、dNTP濃度0.15 mmol·L-1.在此基礎(chǔ)上,利用優(yōu)化的反應(yīng)體系成功篩選出10條用于獐相關(guān)研究的ISSR引物并確定了各自的最佳退火溫度,為今后利用ISSR技術(shù)進(jìn)行獐的物種鑒定與分類、親緣關(guān)系、系統(tǒng)發(fā)育和生理病理學(xué)研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ),也為開展其它大型資源動(dòng)物如黑麂的保護(hù)遺傳學(xué)研究提供理論基礎(chǔ).

作 者： 張龍龍 鮑毅新 于華會(huì) 許婧 孫波 ZHANG Long-long BAO Yi-xin YU Hua-hui XU Jing SUN Bo   作者單位： 張龍龍,鮑毅新,許婧,孫波,ZHANG Long-long,BAO Yi-xin,XU Jing,SUN Bo(浙江師范大學(xué)生態(tài)研究所,金華,321004)

于華會(huì),YU Hua-hui(中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院亞熱帶林業(yè)研究所,浙江,富陽(yáng),311400) 

刊 名： 生態(tài)科學(xué)  英文刊名： ECOLOGICAL SCIENCE  年，卷(期)： 2009 28(4)  分類號(hào)： Q953 Q959.842  關(guān)鍵詞： 獐   正交試驗(yàn)   ISSR   引物篩選  

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