DNA的提取與鑒定實驗報告
在學習、工作生活中，需要使用報告的情況越來越多，報告具有成文事后性的特點。相信很多朋友都對寫報告感到非常苦惱吧，下面是小編收集整理的DNA的提取與鑒定實驗報告，歡迎大家借鑒與參考，希望對大家有所幫助。
實驗原理：
根據成熟雌蟾蜍體內含大量卵細胞且可以方便獲取，細胞內含核酸豐富，沒有其它組織器官等的干擾等優點以確定蟾蜍卵細胞為實驗所需的真核細胞。通過TRIZOL溶液中變性劑破碎真核細胞，然后經過氯仿等有機溶劑抽提RNA，再利用RNA不溶于異丙醇的性質將自身析出，達到分離提純的目的。
TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的`蛋白，核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase（RNA酶）。0.1%的8－羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯合使用可增強抑制作用。異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質并使蛋白質二級結構消失，導致細胞結構降解，核蛋白迅速與核酸分離。β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。
甲基綠―吡羅紅為堿性染料，它分別能與細胞內的DNA、RNA結合呈現不同顏色。當甲基綠與吡羅紅作為混合染料時，甲基綠與染色質中DNA選擇性結合顯示綠色或藍色；吡羅紅與核仁、細胞質中的RNA選擇性結合顯示紅色。其原因可能是兩種染料的混合染液中有競爭作用，同時兩種核酸分子都是多聚體，而其聚合程度有所不同。甲基綠易與聚合程度高的DNA結合呈現綠色。而吡羅紅則與聚合程度較低的RNA結合呈現紅色（但解聚的DNA也能和派洛寧結合呈現紅色）。即RNA對派洛寧親和力大，被染成紅色，而DNA對甲基綠親和力大，被染成綠色。09419
實驗材料：
（一）試劑
甲基綠―吡羅紅染料：①染色劑A液的兩種配制方法
第一種方法：取吡羅紅甲基綠粉1g，加入到100mL蒸餾水中溶解，然后用濾紙過濾，將濾液放入棕色瓶中備用。
第二種方法：取甲基綠2g溶于98mL蒸餾水中，取吡羅紅G5g溶于95mL蒸餾水中。取6mL甲基綠溶液和2mL吡羅紅溶液加入到16mL蒸餾水中，即為A液，放入棕色瓶中備用。（注意：用于核酸染色的是吡羅紅G，請不要錯買吡羅紅B。）
②染色劑B液的配制方法B液是一種緩沖液，由乙酸鈉和乙酸混合而成。先取乙酸鈉16.4g，用蒸餾水溶解至1000mL備用；再取乙酸12mL，用蒸餾水稀釋至1000mL備用。取配好的乙酸鈉溶液30mL和稀釋的乙酸20mL，加蒸餾水50mL，配成pH為4.8的B液（緩沖液）。
③染色劑的配制染色劑是由A液、B液混合配制而成的。取A液20mL和B液80mL混合，就是實驗中所用的吡羅紅甲基綠染色劑。應該注意的是該試劑應現配現用。
2.TRIZOL試劑（Invitrogen公司購買）
3.75%乙醇
4.氯仿
5.異丙醇
6.Nacl(0.14m/l)
（二）器材
1.離心機（3000r.p.m）
2.冰浴
3．研缽
4.燒杯
5.量筒
6.試管
7.玻棒
8.膠頭滴管
9.離心管
10.天平
實驗方法：
制備勻漿：
以班級為單位，稱取大概10g蟾蜍卵細胞（2~3℃保存），于研缽（可置于冰浴鍋上）中，根據10~30mg組織細胞加1mltrizol試劑的量加入其中，快速研磨，制備勻漿。實驗二人合作為一組，每組取大概10ml勻漿。
RNA的提取：
取回勻漿后，室溫靜置10min，使樣品充分裂解――離心(3000r.p.s)20mins――取上清液移至新的離心管――加1/5TRIZOL溶液體積氯仿――在手中反復振蕩搖勻，室溫靜置10min。――離心20mins――取上清液――在上清中加入等體積冰冷的異丙醇，室溫放置10min。――充分混勻，靜置10minute――離心20min――沉淀用75%乙醇洗滌兩次
定性試驗：
取2支干凈試管，一管加入1.5MLRNA溶液（將RNA顆粒狀的沉淀溶于
2ML0.14/NACL溶液中），另一管加入蒸餾水1.5ML,像兩管中加入3M甲基綠-吡羅紅染色劑，溶液變成紅色為陽性反應。
實驗結果：
利用TRIZOL法可成功提取的RNA，并使得甲基綠-吡羅紅染色劑顯紅色。
實驗注意事項：
TRIzol對人體有害，使用時應戴一次性手套，注意防止濺出。
由于本科生實驗室里的為普通離心機，轉速不高，故可適當延長離心時間。
離心后，注意上清液和沉淀的取舍以及對RNA層的小心吸取，否則將導致RNA樣品中有DNA污染。
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